Термодинамический анализ доменной организации кальций-зависимых белков

Цветков Ф.О.

Table of contents :
Термодинамический анализ доменной организации кальций -зависимых белков……Page 1
1. Введение……Page 6
2.1.1.Техника сканирующей калориметрии……Page 9
2.1.2.Калориметрические измерения измерения……Page 11
2.1.3.Анализ резулитатов……Page 13
2.2.1. Структура и функции калмодулина……Page 19
2.2.2. Связывание кальция калмодулином……Page 24
2.2.3.Связывание калмодулина с белками-мишенями……Page 25
2.3. Кальций-векторный белок (CaVP) из Amphioxus……Page 31
2.4. Hsp90……Page 35
2.4.1.Молекулярные характеристики и структура hsp90……Page 36
2.4.2.Структура hsp90: N-концевой домен……Page 38
2.4.3.Структура hsp90: С-концевой домен……Page 39
3.1.2. Калмодулин и пептид RS20……Page 40
3.1.3. Калиций-векторный белок (CaVP)……Page 41
3.2.1. Дифференциальная Сканирующая Калориметрия……Page 43
3.2.2. Круговой дихроизм……Page 45
3.2.3. Изотермическая Калориметрия Титрования……Page 46
3.2.5. Метод поперечных ковалентных сшивок……Page 47
4. Взаимодействие калмодулина с СаМ-связывающим доменом киназы лёгких цепей миозина гладких мышц (RS20) при различной степени……Page 48
4.1. Пептид RS20 связывается с калмодулином в отсутствие ионов кальция……Page 50
4.2. Изменение термодинамических параметров тепловой денатурации апокалмодулина при образовании комплекса с RS20 доказывает,……Page 52
4.3. Данные сканирующей микрокалориметрии подтверждают, что в присутствии ионов кальция RS20 взаимодействует с обеими долями……Page 55
4.4. Данные КД-спектроскопии комплекса апоCaM-RS20 указывают на то, что пептид принимает частично спиральную конформацию……Page 56
4.5. Данные масс-спектрометрии подтверждают существование комплекса апоCaM-RS20……Page 57
4.6. Пептид RS20 сильно увеличивает кооперативность связывания калмодулином кальция, что приводит к отсутствию форм комплекса……Page 61
4.8. Заключение……Page 63
5.1. Рекомбинантный и природный CaVP имеют одинаковые конформации и сходным образом связываются с мишенью……Page 66
5.2. N-концевой домен CaVP не влияет на кальций-связывающие свойства С-концевого домена……Page 68
5.3. Рекомбинантные N-CaVP и С-CaVP не взаимодействуют друг с другом……Page 69
5.4. N- и C-концевые доли CaVP представляют собой отдельные кооперативные домены, а C-домен и степень насыщения его кальцием……Page 71
5.5. Только С-домен CaVP образует эквимолярный комплекс с CaVPТ, а N-домен модулирует это взаимодействие……Page 76
5.6. Заключение……Page 79
6. Тепловая денатурация белка теплового шока hsp90: влияние ионов кальция и магния……Page 81
6.1. Анализ температурной зависимости процесса олигомеризации hsp90 с помощью нативного ПАГ-электрофореза показал, что ионы к……Page 82
6.2. При плавлении hsp90 претерпевает два денатурационных перехода, первый из которых соответствует плавлению N-концевого дом……Page 85
6.3. Ионы кальция и магния снижают термостабильность hsp90 и температуру начала самоассоциации……Page 87
6.4. Спектры КД hsp90 указывают на то, что кальций и магний изменяют третичную структуру белка……Page 89
6.5. Заключение……Page 90
Выводы……Page 92
Список литературы……Page 93